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AO染色的显微镜分析法，采用酸化固定剂使细胞核变性后用荧光显微镜观察，而不再需要流式细胞仪，当然，AO染色后是可以联合流式细胞仪进行分析的。有研究显示正常生育力男性和不育男性精子AO染色结果具有显著性差异。反映男性自然生育力的正常染色质百分率的"分界值"为80%~50%（绿色荧光）。如果精子含有过多的单链DNA( ssDNA )，检测时仅有较少量绿色荧光（<50%)，则会对常规IVF受精产生不利影响。但是与ICSI的妊娠率和活产率没有关联，不含有单链DNA精子的患者，其妊娠率最高。甲苯胺蓝是另一个用于染色质正染和异染的碱性核染料，它能够大量地掺入到致密染色质中，属于针对DNA结构和包装敏感的结构探针。具有完整染色质的精子头部能够染成淡蓝色。核异常的精子（头部染成紫色的精子）与AO染色方法中头部染成橘黄色精子在计数结果上是一致的。
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继发缺乏所引发的闭经症，或治疗给药治疗无效的无排卵症，所使用的剂量是与卵泡发育一致的最低剂量。现在开始使用于治疗原因不明性不孕症患者，并使用高剂量以诱导多个卵泡发育，从而最大化单个周期的妊娠几率。为了减少由排卵诱导所引起的多胎妊娠发生率，当发现过量排卵前卵泡时，仅仅取消治疗周期是不够的，还必须使用能促进卵泡发育的最小化刺激量。降低高危多胎妊娠发生率的技术在不降低患者的妊娠率情况下，减少引起的多胎妊娠需要三步。这三步分别为使用引起排卵的最小刺激量，用低剂量药物连续刺激超过三个周期，以及选择性取消具有显著多胎妊娠风险患者的治疗周期。第一步需要给药、低剂量促性腺激素或脉冲式以刺激单个卵泡发育，增生期后期还可能需要加人给药以抑制排卵前卵泡发育，或需要滑行疗法和抽吸掉多余卵泡。第二步需要根据患者的不孕症病因以及排卵前超声波检查中所测得的患者个体对刺激的反应，从而确定刺激周期的持续时间。第三步，在决定是否要取消治疗周期时，需要考虑患者的年龄、之前失败治疗周期数、遗传性生育力以及患者是否可以承受**妊娠。
