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揭秘胚胎的“冷冻”“解冻”及“破壳”,目前胚胎冷冻基本都是采用玻璃化冷冻法。玻璃化冷冻是指在快速冷冻过程中冷冻保护剂由液态直接冻结为无结构的、极其黏稠的玻璃状态或无冰晶结构的固态,这种玻璃状态能保持其溶液状态的分子和离子分布,从而保持胚胎细微结构的完整性。且在冷冻过程中有一定的冷冻保护剂对胚胎进行保护,后期胚胎将一直在-196℃的液氮中冻存。在这种情况下,细胞几乎是停止一切代谢活动,因此,胚胎基本是没有损伤的。除了胚胎外,目前还有精子和卵子的冷冻,但是相对而言,**后的受精能力要比新鲜卵子稍差。精子、卵子和胚胎的解冻也是在解冻保护液中进行的,有着解冻保护剂的保护作用,精子、卵子和胚胎在解冻过程中的损伤会降到最低。在卵子和胚胎的外层会包裹一层由糖蛋白结构组成的透明带,该结构在胚胎体外培养过程中会逐渐变脆,失去弹性,会影响胚胎的孵出和进一步的着床。因此,需通过化学、机械或激光的方法对胚胎透明带进行切薄、打孔,甚至完整切除,以帮助胚胎从透明带内孵出,这就是辅助孵化技术。目前激光法是最为常用的胚胎孵化方式,可以改善女性年龄≥38岁、基础FSH水平增高、卵子透明带厚度超过17μm、胚胎出现50%以上的碎片、反复移植失败以及冷冻胚胎复苏后移植者的胚胎移植成功率。


在形态学生,调亡以染色质聚集、细胞质浓缩以及细胞核和细胞膜的皱缩为特征,最终细碎裂,整个细胞空泡化并碎裂成调亡小体。通常,体细胞能够在外部机制的作用下发生凋亡,这些机制可作用于细胞膜、线粒体或细胞核等不同水平。经典的细胞膜依赖机制是Fas和Fas受体(CD95)之间的相互作用,两者结合后下游信号可以通过两种通路传递。第一种为线粒体非依赖型通路,包括接头蛋白募集caspase -8到Fas受体的细胞内结构域,形成死亡诱导信号复合体和活化的caspase -8。第二种为线粒体依赖型通路,其中线粒体释放细胞色素C,诱导caspase -9、caspase -3、caspase -6和(或)caspase -7的活化。在细胞质水平,一些刺激信号,包括线粒体膜Bax(前凋亡蛋白Bcl -2家族成员)的活化,导致细胞色素C的释放。


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