(2)采卵:在确定的时间采卵。采卵的途径有:①剖腹直视下穿刺卵泡促排卵。②经腹腔镜促排卵。③B超引导下经腹壁、尿道膀胱或阴道穿刺促排卵。目前多采用经腹腔镜或B超指引下经阴道促排卵,后者尤为方便。
(3)卵子培养:吸出卵泡液后,立即寻找卵子。取出卵细胞后,置入装有人工培养液的培养皿内,并放入一定量的卵泡液,有助于卵细胞的生长发育。培养时间取决于所促排卵泡的成熟度,成熟者一般培养2~6小时。
(4)体外授精:收集精液后应用洗涤法使精液体外获能,然后放入装有卵细胞的培养液内,培养15~24小时,在解剖显微镜下检查,如看到有两个原核存在于卵子母细胞原浆中表示已授精,再继续培养36~42小时。当镜下观察到受精卵已分裂至4~8个细胞时,可考虑作胚胎移植。
(5)胚胎移植:阴道及宫颈用生理盐水清洁再用培养液擦洗,将金属或塑料导管置入颈管内。另一助手在显微镜下用1.3mm的聚四氟乙烯管从培养液内吸出胚胎细胞加吸0.03~0.05ml 培养液或0.03~0.05ml受试者血清,将此管插入宫颈管导管内放至距宫底0.5cm处,送胚胎入宫腔。胚胎移植后需卧床24小时,限制活动3~4天,接受黄体酮治疗。移植后2周作β-GCG测定,如无妊娠情况,停用黄体酮。移植成功的妊娠属高危妊娠予以监护。