脐带血间充质干细胞分化为神经样细胞研究

细胞分化（cell differentiation）是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，最终产生标志性蛋白质。

【实验目的】

研究单唾液酸四己糖神经节苷脂通过体外诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞并探索其最佳诱导浓度。

【实验方法】

取足月妊娠剖宫产健康胎儿的脐带，剔除脐动脉和脐静脉，用酶消化法获得MSCs，贴壁培养，采用流式细胞技术行细胞表型检测。扩增后，取第4代细胞，分为A、B、C、D、E 5组，前4组为实验组，E组为对照组，实验组各组GM1浓度分别为：A组50μg/m L、B组100μg/m L、C组150μg/m L、D组200μg/m L，诱导液用L-DMEM培养基配制，对照组仅使用L-DMEM培养基。观察5组诱导人脐带血间质干细胞向神经样细胞分化的作用，每60min观察细胞诱导前后的形态，在第360min时采用免疫细胞染色法检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经丝蛋白(neurofilaments protein H,NF-H)以及神经元特异性标记物微管结合蛋白-2(microtubule associated protein 2,MAP-2)的表达情况，并计算阳性细胞率。

【实验结果】

1、大部分原代细胞在接种9h后贴壁，呈多边形、菱形，之后变为长梭形，细胞开始以漩涡、放射状生长。

2、P3、P5和P10代细胞表面的分子标记经流式细胞术检测发现，均表达CD105、CD90和CD73，却不表达HLA-DR、CD19、CD11b、CD45以及CD34。

3、诱导至第360分钟后，实验组各组细胞均有神经样细胞出现，表现为细胞胞体收缩成椭圆形，伸出较长突起，以双极细胞居多。免疫细胞化学检测显示实验组各组NF-H、MAP-2表达阳性，胶质纤维酸性蛋白GFAP表达为阴性，C组(150μg/m L)细胞NF-H、MAP-2阳性表达率最高。对照组细胞诱导前后变化不明显。

【实验结论】

GM1可以诱导人脐带间充质干细胞向神经样细胞分化，150μg/m L为最合适诱导剂量。