干细胞移植治疗酒精性肝硬化

肝硬化是肝纤维化的晚期阶段，表现为再生结节被纤维带包围，这些纤维带是响应慢性肝损伤而形成的。

目前，晚期肝硬化最有效的治疗方法是肝移植。然而，该程序存在一些局限性，包括缺乏供体、手术并发症、移植后的免疫抑制和高昂的医疗费用。正在研究生物人工肝、干细胞疗法和再生医学等新的治疗方法，以期改善肝硬化患者的预后。

正常肝脏与肝硬化肝脏对比

骨髓 (BM) 细胞、造血干细胞和间充质干细胞 (MSCs) 移植作为肝硬化的潜在治疗方法越来越受到关注。骨髓和造血干细胞已被证明可加速肝脏再生、减少肝纤维化并恢复体内肝功能。BM-MSCs更具体地说, 具有自我更新和分化为包括肝细胞谱系在内的多个细胞谱系的潜力, 应更多地关注MSCs的临床应用。一些临床研究已经证明BM衍生的MSC (BM-MSC) 治疗慢性肝病，主要是病毒性肝硬化患者的和可行性。

造成肝硬化的原因之一：酒精是世界范围内肝硬化的常见原因之一，酒精性肝硬化 (AC) 是造成高死亡率的原因。此外，很少有研究探讨BM-MSCs在AC患者中的应用。在我们之前涉及11名AC患者的临床试验中，自体BM-MSC移植诱导肝纤维化的组织学和定量改善。基于该试点研究的有希望的结果，在这项2期试验中评估了自体BM-MSC移植治疗AC患者的和安全性。

骨髓间充质干细胞

目的：评估干细胞移植治疗酒精性肝硬化的和安全性。

方法：此次Ⅱ期临床试验共招募了81患者，通过筛选共有72名符合条件的参与者被随机分配到三组。在这些患者中，17例在随机分组后被排除，55例（对照组18例，1次自体BM-MSC组18例，2次自体BM-MSC组19例）完成了研究并进行了随访。

入组后，在两个BM-MSC组中进行BM抽吸以分离BM-MSC。分离的BM-MSCs培养1个月并通过肝动脉注入肝脏。所有符合条件的参与者以1:1:1的比例随机分配到对照组（不移植）、一次性BM-MSC组（BM后1个月肝动脉注射5×107自体BM-MSCs抽吸）和两次BM-MSC组（BM抽吸后1个月和2个月肝动脉注射5×107自体BM-MSCs）。

干细胞移植治疗酒精性肝硬化：Ⅱ期临床试验

主要评估标准是基于天狼星红染色的纤维化量化的改善。次要评估标准包括肝功能测试、Child-Pugh评分和终末期肝病模型评分。

BM-MSCs的活力、免疫表型和分化潜能

通过排除试验评估的BM-MSCs (Livercellgram) 的平均存活率百分比为88.2±6.1%对于一次性BM-MSC组和87.5±6.3% (第一次注射) 和86.2±6.8% (第二次注射) ) 用于两次BM-MSC组。MSCs临床使用的标准是在给药前3-4天测试时存活率>70%并且不存在微生物污染（细菌、真菌、病毒或支原体）。

干细胞移植治疗酒精性肝硬化：Ⅱ期临床试验

在免疫表型评估中，流式细胞仪分析表明，两组BM-MSCs的MSC标志物CD73和CD105均呈阳性（>85%的细胞呈阳性），而造血细胞标志物CD14、CD34和CD45呈阴性（<3%的细胞呈阳性）。

在第二次传代结束时，BM-MSCs已成功分化为成骨细胞和脂肪细胞。

主要结果

在纤维化量化（之前与之后）方面，一次和两次BM-MSC组与25%（19.5±9.5%对14.5±7.1%）和37%（21.1±8.9%对13.2±6.7%) 胶原蛋白比例分别降低 ( P<0.001)。在组间比较中，与1次bm-msc移植相比，2次bm-msc移植与纤维化定量结果的改善无关（p>0.05）。

Laennec纤维化评分进一步证实了这些结果。根据Laennec纤维化评分，27%的对照组、61%的1次BM-MSC组和37%的2次BM-MSC组的组织学改善。

次要结果

评估整体肝功能的Child-Pugh评分在一次BM-MSC组（7.6±1.0对6.3±1.3；P =0.035）和两次BM-MSC组（7.8±1.2对6.8）显著改善±1.6；P=0.003)。对照组与Child-Pugh评分的变化无关（8.1±1.3vs7.4±1.5；P>0.05）。对照组与单次BM-MSC组的Child-Pugh评分变化差异有统计学意义（P=0.014）。

相比之下，对照组（7.1±4.2vs6.0±3.4）、一次性BM-MSC组（4.5±3.4vs4.2±2.5）和二次BM-MSC组（4.5±3.9对5.4±3.7）（P>0.05）。

BM-MSC治疗后其他相关实验室参数（AST、ALT、白蛋白、胆红素、ALP、GGT和INR）的变化见表3。在一次性BM-MSC组中，AST、ALT、白蛋白、胆红素、GGT和INR的改善没有达到统计学意义。1次BM-MSC组和2次BM-MSC组的ALP水平显著降低。

安全

在72名患者的总样本中，24名对照组和44名接受自体BM-MSC移植的患者定期监测与干细胞治疗相关的任何可能的AE迹象，如发热、超敏反应和急性排斥热。在三组之间没有观察到AEs发生率（全部和严重）的差异。在两次BM-MSC组中观察到1例与治疗相关的AE（发热）。最后，在随访期间没有发现BM-MSC相关肿瘤发展的证据。

讨论

基于之前使用MSCs进行的体内和体外研究，间充质干细胞移植已被确定为一种有前途的肝脏再生方法，并具有多种优势，包括早期获得、强大的分化能力、低免疫原性和免疫调节特性。然而，一些问题仍有待探索，包括最佳注射时机、输注MSCs的最佳类型、最有效的MSCs注射数量以及最佳给药途径。

结论

临床研究发现酒精性肝硬化患者的经过自体骨髓间充质干细胞移植与肝纤维化的组织学减少有关，然后是功能和临床改善。因此，骨髓间充质干细胞移植治疗可作为改善酒精性肝硬化患者肝功能的潜在补充治疗工具。本研究的结果强调了未来3期研究的重要性，此研究证明了自体骨髓间充质干细胞移植在改善酒精性肝硬化患者预后和生存方面的有效性。