大肠癌的自杀基因治疗

　　(一) 缝隙连接与细胞接触：Bi等［5］认为前药的毒性代谢产物或自杀基因表达的酶通过细胞间缝隙连接传入邻近细胞，引起细胞毒作用。他们将tk-和tk+的HT1080细胞混合培养，并加3H标记的GCV，结果发现除了tk+的细胞可掺入3H标记的GCV外，与其相接触的tk-细胞也可掺入3H标记的GCV，而未接触的tk-细胞内则没有。Yang-L等［6］用大肠癌细胞体外进行实验，发现连接蛋白-43与连接蛋白-26在BE中起重要的作用。对于CD基因引起的BE，则不需细胞接触而发挥作用［4］，5-FU可不通过细胞接触而发挥细胞毒作用［7］。可以设想，自杀基因表达的产物通过缝隙连接或易化扩散传递到周围细胞后，降低了转基因细胞内基因表达的产物浓度，在应用药物前体后，对转基因细胞杀伤作用减弱，从而延长了其成活时间，也可延长其向外传递基因产物的时间，可进一步增强BE的作用。

　　(二) 免疫反应：Caruso等［8］报道在逆转录病毒介导转染的结肠癌转移动物模型中，经GCV处理后发现肿瘤床有局部的免疫反应，主要是CD4+和CD8+ T细胞，推测免疫反应在自杀基因治疗中起一定的作用。Freeman［9］通过PTPCR技术和免疫组 化技术发现，在具有BE的肿瘤细胞内IL-1，IL-6的mRNA表达产物持续增多，使肿瘤细胞内发生强烈的免疫反应。Gagandeep-s等［10］在动物实验中用表达HSV-tk逆转录病毒包装细胞和结肠癌细胞接种M26小鼠，并且用GCV腹腔注射，结果发现有免疫力的小鼠的肿瘤明显消退，而在免疫抑制的无胸腺小鼠中却未发现BE，更证实了免疫反应在抗肿瘤中的作用。

　　三、 联合治疗

　　自杀基因疗法有很多优点，由于应用先转导后治疗的途径，使整个基因治疗变得相对容易控制。它还可以直接杀伤肿瘤细胞，具有可诱导免疫反应，可靶向作用等特点。但是，它也存在不足之处，如：自杀基因诱导机体的免疫反应不够强大，体内应用对肿瘤细胞的转导效率比较低等。这些均制约着自杀基因的应用，于是，有的学者把目光投向了自杀基因的联合治疗。

　　(一) 自杀基因与细胞因子基因的联合应用：细胞因子是一类由免疫细胞和相关细胞产生的调节细胞功能的高活性多功能的蛋白质分子，将细胞因子基因转导入肿瘤细胞内，可以大大增强肿瘤细胞的免疫原性，有效诱导肿瘤细胞特异性抗肿瘤免疫功能。将自杀基因和细胞因子基因联合应用，可以取长补短，提高治疗效果。一方面，自杀基因的表达可以直接杀伤一部分肿瘤细胞，消除肿瘤负荷。另一方面，细胞因子基因的表达可以激发机体的抗肿瘤免疫功能，这种联合治疗也已经在大肠癌治疗方面进行了实验研究。

　　Chen等［11］对小鼠结肠癌肝转移的动物模型通过重组腺病毒载体分别转导ADV/RSV-MIL-2基因和ADV/RSV-tk基因，然后给予GCV治疗。实验表明分别用IL-2基因，tk基因和两者联合治疗的肿瘤面积分别为120mm2，25mm2和5mm2，并发现抗肿瘤效果的提高与IL-2介导的T细胞免疫增强有关。