安捷伦知识小课堂：Ki-67 MIB-1克隆号染色出现细胞膜阳性是真阳性吗？

文章转载自“安捷伦诊断与基因组学”公众号

Ki-67 是一种定位于细胞核的蛋白, 与核糖体 RNA 转录有关, 可以作为一个细胞增殖的标记物。Ki-67 在细胞增殖的各期(g1,s,g2 和 m)中均有表达,但在细胞静止期 g0 期不表达。Ki-67 是病理科最常开展的免疫组化检测项目，每一种肿瘤均需检测。通过 Ki-67 指数高低，判断肿瘤分化程度、浸润、转移及预后[1]。

在免疫组化检测过程中，通常使用扁桃体作为对照。在扁桃体里面，Ki-67 呈现出在扁桃体生发中心暗区的 B 细胞中等强度至强阳细胞核染色、基底和副基底鳞状上皮细胞弱至中等强度细胞核的染色状态[2]（图 1）。

Ki-67 的克隆号有 MIB-1,SP6,K2,30.9,MX006 等。

图 1. Ki-67 抗原 MIB-1 在扁桃体上染色 （安捷伦 FLEX 即用型一抗免疫组化，染色对照图谱第一版[2]）

在甲状腺变透明小梁肿瘤（hyalinizing trabecular tumor, HTT）中，出现 Ki-67 抗体细胞膜阳性是不是正确的表达呢？

Hirokawa 等[3]研究发现，使用 MIB-1 克隆号抗体在 13 例甲状腺变透明小梁肿瘤中，90%或以上的肿瘤细胞中表现出细胞膜和细胞质强阳性（图 2）。10 例状癌均未见细胞膜或细胞质阳性，正常定位于细胞核。所以，在 MIB-1 克隆号表达细胞膜和细胞质阳性是甲状腺透明小梁肿瘤的特征。MIB-1 染色有助于鉴别透明化小梁肿瘤与状癌，后者与透明化小梁肿瘤有许多相同的细胞学和组织学表现。

图 2. Ki-67 抗原 MIB-1 在甲状腺变透明小梁腺癌上染色，使用 Dako MIB-1 克隆号。

该现象在其他部分肿瘤中也有发现，例如部分浸润性乳腺癌 (图 3) [1]、间皮瘤以及肾嗜酸细胞瘤[5]。在浸润性乳腺癌里细胞膜/细胞质 Ki67 表达与高级别、HER2 扩增和 ER 的肿瘤显著相关[1]。

图 3.浸润性乳腺癌 Ki67 细胞质细胞膜阳性的两种不同模式[1]。左:浸润性导管癌伴管腔形成的极性表达。右图: 胞膜的聚集性表达。使用 Dako MIB-1 克隆号，1:50 稀释度；

Leonardo 等[4]使用了不同克隆号（MIB-1, 7B11, KIS5, KI88, SP6）的 Ki-67 抗体进行对比检测。在手工以及自动化仪器之间，使用多种条件的染色流程，发现只有 MIB-1 克隆号的抗体在室温会呈现甲状腺透明小梁肿瘤细胞膜染色的特点。而与抗原修复方式、抗体孵育条件以及生物素或非生物素标记的显色系统之间均无关（图 4）。

图 4[4]，在室温下，使用 MIB-1 和过氧化物酶、无生物素检测系统检测，出现膜阳性。

A

甲状腺透明小梁肿瘤 (250X)，

B

浸润性乳腺癌 (250X)，

C

肾嗜酸细胞瘤(400X)。

同样的病例，没有膜阳性表达。

D

在 37 度使用 MIB-1 染色甲状腺

透明小梁肿瘤 (400X)，同图 A 标本。

E

使用 SP6 克隆号，在浸润性

乳腺癌中(250X)，同图 B 标本。

F

7B11 克隆号在肾嗜酸细胞瘤 

(400X)，同图 C 标本。

正常细胞中 Ki-67 存在两个含 3256 及 2896 氨基酸的亚型，两者之间的差异是长片段亚型多出一个 360 个氨基酸的肽段。造成该细胞膜染色现象的确切机制尚不清楚，推断可能的原因是，在某一细胞膜组分的帮助下，Ki-67 与 MIB-1 抗体的 Fab 段结合，存在交叉反应。

虽然确切机制未明，但在甲状腺透明小梁肿瘤中，MIB-1 克隆号的膜染色是特征性现象，使用该克隆号出现 Ki-67 膜染色，即可诊断为 HTT。

以上内容仅限研究使用。不可用于诊断目的。