基因工厂云探秘系列4-- 从PCR到基因组装：揭示合成关键步骤与精准验证

北京2024年9月25日 /美通社/ -- 由于寡核苷酸从头合成长度的限制，通常采用DNA组装技术、使用短寡核苷酸作为原料来构建更长的合成片段。常用的组装方法包括全片段酶促连接法和酶促填充法。全片段酶促连接法利用DNA连接酶将具有5'磷酸化且重叠互补的寡核苷酸片段连接形成双链DNA。酶促填充法基于聚合酶循环组装（Polymerase Cycling Assembly，PCA）技术，使用DNA聚合酶将重叠的寡核苷酸延伸成双链片段，通过overlap PCR获取较长片段，然后将各片段一起组装至载体上，最终构建出完整载体。

图1.擎科生物基因合成流程图

擎科生物的基因合成智能化生产平台能够实现1.5 kb以内短片段的自动化生产，有效减少人工操作失误，大幅提高生产效率。客户可以根据不同的应用需求选择合适的载体骨架。擎科生物建立了一个准确规范的载体库，提供160多个免费载体供选择，并按需制备合格的线性化载体。同时，我们对客户自备载体进行NGS测序验证，确保序列准确，并提供免费存储服务，方便后续使用。

擎科生物自主研发的高品质重组酶、聚合酶和感受态细胞，确保载体构建过程高质高效。全流程试剂控制确保每个环节的质量。载体与PCR片段的连转反应由自动移液工作站操作，复苏液通过自动涂布仪进行样品涂布，并利用全自动菌落挑选仪筛选阳性克隆，支持二维码和条形码管理，大幅提高生产效率，减少人工失误。擎科生物还自主开发了"磁珠法测序平台"用于Sanger测序，确保目的序列100%准确，并采用创新的NGS测序技术——Fast NGS，保障全质粒序列的准确性。在智能化基因合成生产线的支持下，基因合成交付率超过99.5%，最快可在3天内完成交付。

最后让我们一起深入了解擎科生物的智能化产线。以下这段视频将展示从自动化序列分析到筛选、测序和质检，每一步都在精密的控制下进行，确保基因合成的高效率和高质量。

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